Introducción General

El INEVH integra desde 1997 la Administración Nacional de Laboratorios e Institutos de Salud (ANLIS) "Dr.Carlos G.Malbrán", realizando principalmente actividades de investigación y docencia en el área de las enfermedades virales emergentes, y producción de biológicos, siendo prioritario en este área el proyecto de producción en el país de la vacuna Candid 1 contra la Fiebre Hemorrágica Argentina.

Desde 1992 el INEVH amplió sus objetivos e inició estudios en Arbovirus y Hantavirus, desarrollando un rol importante de liderazgo nacional y regional en la identificación de los brotes de infecciones por hantavirus en la región y en la detección de la reemergencia del dengue en nuestro país. La Institución participa activamente en los esfuerzos para reconocer e investigar ocurrencias poco comunes de enfermedades y epidemias que pudieran aparecer y asiste en la capacitación de los países de la región en los procedimientos que se utilizan normalmente en la investigación de hantavirosis, fiebres hemorrágicas víricas y arbovirosis.

Desde 1985 el INEVH funciona como Centro Colaborador de la Organización Mundial de la Salud (OMS) en Fiebres Hemorrágicas Virales y desde 1992 en Arbovirosis.

FIEBRE HEMORRAGICA ARGENTINA (FHA)

El INEVH es sede del Programa Nacional de Lucha contra la Fiebre Hemorrágica Argentina, que se ejecuta mediante convenios con las cuatro provincias afectadas por la enfermedad (Buenos Aires, Córdoba, La Pampa y Santa Fe), y cuyas acciones son las siguientes: vigilancia epidemiológica, diagnóstico virológico, habilitación de centros asistenciales y bancos de plasma inmune para tratamiento, educación para la salud, vacunación de población expuesta a riesgo, investigaciones clínicas, virológicas y ecológicas, desarrollo y producción de vacuna.

1- Vigilancia epidemiológica: procedimiento para la notificación de los casos.

El médico de cabecera debe notificar el caso al Centro de FHA más cercano y al INEVH mediante el envío de la ficha de notificación individual, de acuerdo a las instrucciones que figuran en la ficha. Esta ficha debe adjuntarse a la muestra de sangre extraída al enfermo dentro de las últimas 24 horas.

Ver en ANEXO la ficha de notificación y las instrucciones para la extracción, separación, rotulación, conservación y envío de las muestras de suero.

2. Diagnóstico virológico de los casos notificados.

1. La técnica que se utiliza de rutina para establecer el diagnóstico serológico de FHA por su sencillez y sensibilidad es la de ELISA. Para realizar el diagnóstico serológico es imprescindible disponer de: 1) una muestra del período agudo obtenida antes de tratar al enfermo con plasma inmune, y 2) una o más muestras de suero obtenidas durante la convalecencia (alrededor de los 60 días). Los resultados de las pruebas serológicas dependen de la calidad de las muestras. Una buena muestra de suero debe reunir varias condiciones, por cuyo motivo en el ANEXO se adjuntan instrucciones sobre los procedimientos a seguir.
2. En los pacientes muertos no es posible establecer el diagnóstico serológico, ya que la FHA se caracteriza por la ausencia de anticuerpos en el período agudo de la enfermedad. Estos aparecen en la convalecencia con la recuperación de los enfermos. Por este motivo es necesario recurrir a otros métodos diagnósticos, tales como el aislamiento viral, las técnicas moleculares (RT-PCR) y el diagnóstico inmunohistoquimico. Los resultados de estos estudios dependen también de la calidad de las muestras. Una buena muestra para estos estudios debe reunir varias condiciones que se especifican en el ANEXO.

2. Bancos de plasma de convalecientes o plasma inmune de FHA

El plasma que contiene anticuerpos contra el virus Junin constituye el tratamiento específico de la FHA, reduciendo en forma muy significativa la letalidad (1%) cuando se lo administra dentro de los primeros ocho días de la enfermedad y en dosis estandarizadas de anticuerpos neutralizantes (AcNT) contra le virus Junin. Esta dosis es de 3500 unidades terapéuticas por Kg de peso corporal (UT/Kg).

Las cuatro Provincias afectadas disponen de Bancos de Plasma de Convalecientes.

Para obtener las unidades de plasma de convalecientes de FHA para el tratamiento de un enfermo internado en cualquier institución pública o privada, lo único que se requiere es que el médico de cabecera envíe al Centro de FHA más cercano, por intermedio de un familiar o allegado del paciente, la solicitud junto con la ficha de notificación del enfermo y una muestra de sangre extraída al enfermo dentro de las últimas 24 horas. Con estos requisitos, el banco de plasma entregará gratuitamente las unidades de plasma de convalecientes al familiar o allegado.

En el ANEXO se adjunta la ficha de solicitud de plasma de convaleciente.

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INSTRUCCIONES PARA LA EXTRACCIÓN, SEPARACIÓN, ROTULACIÓN, CONSERVACIÓN Y ENVIO DE LAS MUESTRAS DE SUERO

1- Extracción de la sangre

Por punción venosa, preferentemente con el enfermo en ayunas, previa desinfección de la piel del pliegue del codo con alcohol 70°ó con alcohol yodado. Extraer 10 cc de sangre con un tubo al vacío y dejar coagular colocando el tubo con sangre en una gradilla, a temperatura ambiente, durante 24 horas. En caso de no disponer de tubos al vacío para la extracción, se puede utilizar una jeringa y aguja estériles y descartables. En este caso colocar los 10 cc de sangre en un tubo estéril, seco, con tapón de goma estéril, y sin anticoagulantes. Antes de separar el suero se recomienda dejar el tubo con la sangre a temperatura ambiente durante 24 horas.

 

2- Separación y envase de las muestras de suero

A las 24 horas de la extracción se procede a separar el suero de la siguiente manera:

a) Si la extracción se hizo con tubo al vacío: El coágulo estará bien retraído y generalmente, no será necesario centrifugar para separar el suero.

b) Si la extracción se hizo con jeringa y aguja: En general, la retracción del coágulo no será tan buena como cuando la extracción se realiza con tubos al vacío, por lo tanto se deberá centrifugar el tubo con sangre coagulada.

Luego se procede a separar el suero sobrenadante asépticamente, empleando una pipeta Pasteur ó similar estéril. El suero así separado debe ser envasado en otro tubo estéril, seco, con tapón de goma estéril.

 

3- Rotulación de las muestras de suero

Para su correcta identificación, es imprescindible que cada muestra de suero esté rotulada en forma clara y completa. El rótulo, que puede ser un trozo de tela adhesiva adherido al tubo con suero, deberá especificar en forma legible:

a) Apellido y Nombre(s) del paciente.

b) Número del Código Postal del Centro de FHA, seguido por el número de la muestra de suero, este último en números romanos (I ó II).

c) Fecha de extracción de la muestra de suero.

Ejemplo: enfermo Carlos A. García, número de código postal 2607 del Centro de FHA de Villa Cañas, muestra de suero del período agudo extraída el 16-3-98. El rótulo debe confeccionarse de la siguiente manera:

4- Conservación de las muestras de suero

Las muestras de suero, debidamente rotuladas, deben ser conservadas refrigeradas a -20°C, hasta su envío a los laboratorios de referencia. (mantenerlas en congelador para plasma ).

5- Número de muestras de suero que se requieren para establecer el diagnóstico de FHA

a) Muestras del período agudo (suero I): Debe obtenerse cuando el enfermo se interna ó durante los 2 ó 3 primeros días de internación, siempre antes de la transfusión de plasma de convalecientes de FHA

b) Muestra del período de convalecencia (suero II): Se tratará de obtener una muestra de suero de la convalecencia aproximadamente a los 60 días de la muestra del período agudo.

6- Envío de las muestras de suero al laboratorio de referencia

a) Cada Centro de FHA conservará las muestras de suero en la congelador del banco de plasma de convalecientes hasta su envío al laboratorio de referencia. Se recomienda conservar la muestra I en el Centro respectivo hasta que se obtenga la muestra II del paciente y recién entonces enviar ambas muestras para su estudio serológico.

b) Para su envío al laboratorio de referencia, las muestras serán acondicionadas en conservadoras de telgopor, con hielo y sal gruesa para asegurar su refrigeración. En todos los casos, se tomarán los recaudos necesarios para que el transporte de las muestras se realice en menos de 24 horas.

1- Extracción de la sangre: por punción venosa, previa desinfección de la piel con alcohol 70° o con alcohol yodado. Extraer 10cc. de sangre con tubo heparinizado al vacío. En caso de no disponer de tubos al vacío para la extracción, se puede utilizar una jeringa y aguja estéril y descartables. En este caso colocar los 10cc de sangre en un tubo estéril con heparina, con tapón de goma estéril.

2- Rotular la muestra según se explicó previamente.

3- Las muestras para aislamiento solo serán útiles si han sido conservadas a -70 °C. Estas condiciones son difíciles de obtener fuera del laboratorio de referencia , por lo que se aconseja su envío inmediato .

4- Si las muestras para aislamiento son enviadas inmediatamente luego de su extracción y se estima que su arribo al laboratorio de referencia se hará dentro de las 24 hs. posteriores a la extracción, estas muestras pueden ser enviadas perfectamente acondicionadas con refrigerantes. En caso de que esto no sea posible, se deberá utilizar hielo seco para su envío.

La muestra de elección para el diagnóstico por PCR es el coágulo, el cual deberá remitirse refrigerado a 4ºC, por lo que se aconseja el traslado inmediato al laboratorio de referencia. Eventualmente puede usarse la muestra para aislamiento, pero disminuye la sensibilidad de la técnica.

Se recomienda comunicarse con el laboratorio de referencia para avisar del envío de estas muestras.

La guardia del INEVH funciona durante los 7 días de la semana para la recepción de estas muestras.

LABORATORIO DE REFERENCIA

PERGAMINO Instituto Nacional de Enfermedades Virales Humanas
Monteagudo 2510
2700 - Pergamino
TE: (0477) - 29712 al 14 / 33044
FAX: (0477) – 33045
E-mail: postmaster@inevh.sld.ar

SOLICITUD DE PLASMA INMUNE (PLASMA DE CONVALECIENTE DE FHA)

 El que suscribe Dr. .......................................................................................................................................

Matrícula N° .......................

médico de cabecera del paciente........................................................................................

que se encuentra internado en .......................................... .....................................................

solicita plasma de convaleciente de FHA, de grupo sanguíneo.............. Rh.............

A fin de determinar la dosis de plasma adecuada informo que dicho paciente pesa................... kgs.

Se adjunta la ficha de notificación individual correspondiente y una muestra de sangre para serología extraída dentro de las últimas 24 horas ⁽¹⁾.

 Lugar........................................................... Fecha............................

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Firma del medico

(1) La muestra de sangre debe ser extraída sin anticoagulantes u otros aditivos, ya que se empleará el suero para hacer el diagnóstico virológico cuando se obtenga la segunda muestra, dentro de los 60 días. Se recomienda extraer 10 cc de sangre venosa (enfermo preferentemente en ayunas) utilizando tubos al vacío. Enviar el tubo con sangre coagulada con el familiar ó allegado del paciente que concurra a retirar el plasma de convaleciente. En caso de utilizar jeringa y aguja para la extracción de sangre, las mismas deben estar secas y estériles, y la muestra de sangre debe envasarse en tubos secos y estériles, sin anticoagulantes y con tapón de goma estéril.

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