RED DE LABORATORIOS DE DENGUE, FIEBRE AMARILLA Y ARBOVIRUS DE LAS ENCEFALITIS
CENTRO NACIONAL DE REFERENCIA DE DIAGNOSTICO DE DENGUE: INEVH.
RESPONSABLES: Dra. Gabriela Avilés y Dra. Delia Enría

1. INTRODUCCION

El Dengue (DEN) y la Fiebre Amarilla (YF) son enfermedades agudas graves transmitidas por mosquitos, cuyo vector principal es Aedes aegypti. En la Argentina se han registrado en varias ocasiones, siendo las mas importantes la epidemia de DEN del año 1916 en ambas márgenes del río Uruguay y las epidemias de YF urbana de 1871 en Buenos Aires y YF selvática de 1966 en Misiones y Corrientes. El Ministerio de Salud de la Nación constató la presencia de Ae. aegypti en las zonas templada y subtropical del país. En 1997, este Centro de Referencia constató la reintroducción de DEN en el país y en 1998 diagnosticó una epidemia producida por el virus DEN 2 en la provincia de Salta.

Los Arbovirus de las encefalitis equina del este y del oeste (EEE y WEE) causan epizootias en equinos en nuestro país desde principios de siglo a intervalos de 5-10 años, y se han constatado casos humanos producidos por WEE en 1972-73 y 1982-83 en Viedma, Pcia. de Río Negro. El vector del virus WEE, Ae. albifasciatus, se encuentra ampliamente distribuído en la Argentina y es una peste. El virus EEE nunca se aisló de mosquitos en el país y tampoco se han diagnosticado casos humanos.

El virus de la encefalitis de San Luis (SLE) es transmitido por mosquitos Culex pipiens y se ha constatado una alta prevalencia de anticuerpos en humanos en el país, sin embargo, no se han registrado casos humanos en los últimos años.

Por ultimo, el virus de la encefalitis equina venezolana (VEE) subtipo I epizoótico, se considera exótico en la Argentina, sólo se constató una infección de un equino post-vacunal, por contaminación de una vacuna WEE-EEE.

La mayoría de las encefalitis virales humanas no son diagnosticadas en la Argentina, por ello es necesario investigar los agentes antes mencionados.

 

FUNCIONES:

- Realizar la vigilancia de Dengue (DEN) y otros arbovirus en la República Argentina basado en el Diagnóstico de laboratorio.

- Realizar el diagnóstico etiológico de DEN, YF, Encefalitis de San Luis (SLE), Encefalitis equina del este (EEE), Encefalitis equina del Oeste (WEE) y Encefalitis Venezolana (VEE) en humanos y animales.

- Realizar estudios virológicos para detectar tempranamente la circulación de virus y adoptar medidas de prevención y control.

- Transferir la técnica de ELISA a utilizar en el diagnóstico a los laboratorios regionales seleccionados.

- Actuar como laboratorio de referencia para la confirmación de casos por aislamiento viral, serología, pruebas moleculares e inmunohistoquímica.

- Capacitar al personal de los laboratorios regionales en el Diagnóstico.

- Promover la formación de recursos humanos para la difusión de normativas de procedimientos y asesoramientos.

 

ACTIVIDADES

• Servicio Diagnóstico
• Estudio de brotes
• Estudios ecológicos
• Capacitación de personal de las provincias integrantes de la red de laboratorios en diagnóstico de arbovirus
• Producción de biológicos para fines diagnósticos

Técnicas que se utilizan hasta ahora:

Serología:

• MAC-ELISA para virus Dengue (DEN), Fiebre Amarilla (YF) y Encefalitis de San Luis (SLE)
• Hemoaglutinación para virus DEN, YF, SLE, Encefalitis Equina del Este (EEE), Encefalitis Equina del Oeste (WEE) y Encefalitis Equina Venezolana (VEE)
• Inhibición de hemoaglutinación (IHA) para los mismos virus
• Neutralización (NT) en cultivos de células Vero C176 para los mismos virus

Aislamiento viral:

• Aislamiento de Arbovirus a partir de muestras de humanos, animales silvestres y mosquitos en ratón lactante SPF, en cultivos de células C6/36 o en mosquitos por inoculación intratorácica.
• Identificación de virus aislados por tests serológicos NT, IHA o por Inmunofluorescencia utilizando anticuerpos monoclonales

Técnicas moleculares

• PCR para DEN 1, 2, 3 y 4 y YF

Estudios Ecológicos

• Captura de mosquitos, roedores, aves u otros animales silvestres utilizando trampas y redes
• Toma de muestras de sangre y/o vísceras de animales silvestres capturados para serología o aislamiento
• Identificación de los animales capturados

Producción de Biológicos

• Antígenos de DEN 1, 2, 3 y 4, YF, SLE, EEE, WEE, VEE
• Sueros inmunes para Arbovirus. Líquidos ascíticos hiperinmunes para los virus mencionados

Otras actividades:

Mantenimiento de la línea celular C6/36

Formación de un cepario de arbovirus para la Argentina

Mantenimiento de stocks de virus y ratones congelados a –70ºC

CENTROS QUE PARTICIPAN

En etapa de integración. Se realizó la transferencia de la técnica de ELISA para DEN de personal de 12 provincias.

PRODUCCION Y PROVISION DE RECURSOS

El INEVH produce y distribuye los antígenos de DEN a los laboratorios seleccionados. El conjugado es provisto por OPS y distribuído por el INEVH a los mismos laboratorios.

CONTROLES DE CALIDAD

Los Antígenos de Dengue producidos son controlados en el CDC de Puerto Rico, Centro de Referencia de OPS/OMS.

Se realizan pruebas de Proficiencia evaluadas por los centros colaboradores de OPS/OMS (CDC-Puerto Rico, IPK-Cuba).

El INEVH controla el funcionamiento de los laboratorios regionales a los que se realizó transferencia de tecnología por pruebas de proficiencia.

Se adjuntan definición de caso clínico, ficha clínica- epidemiológica, instrucciones para la toma y envío de muestra y algoritmo para la toma de muestra de DEN. Se adjuntan además ficha clínico-epidemiológica para encefalitis humanas e instrucciones para la toma de muestra.

DEFINICION DE CASO DE DENGUE (OMS)

Caso clínico

Enfermedad aguda febril caracterizada por dolor de cabeza frontal, dolor retroocular, de los músculos y las articulaciones y rash.

Clasificación de casos

Probable: Enfermedad aguda febril con dos o más de las siguientes manifestaciones:

- dolor de cabeza
- dolor retroorbital
- mialgias
- artralgias
- rash
- manifestaciones hemorrágicas leves
- ocurrencia en el mismo lugar y tiempo de otros casos confirmados de DEN.

Confirmado: un caso confirmado por el laboratorio virológico.

Reportable: todo caso probable y confirmado debe ser reportado como caso de DEN a las autoridades de salud locales y nacionales.

Caso clínico de Fiebre Hemorrágica de Dengue

- Fiebre
- manifestaciones hemorrágicas: al menos la prueba del torniquete positivo, petequias, púrpura, equimosis, epistaxis, hemorragia gingival y/o del tracto intestinal, hematemesis y/o melena.
- Trombocitopenia (100.000 mm³ o menos).
- Extravasación de plasma debido a una incrementada permeabilidad capilar manifestada al menos por: Indice de Hematocrito inicial aumentado en un 20 % o más o disminuído en un 20% o más después del tratamiento ;signos comunes asociados- efusión pleural, ascitis e hipoproteinemia.

Caso clínico de Síndrome del shock de Dengue

Todos los criterios anteriores, más:

- Hipotensión o estrechamiento de la tensión diferencial (20 mmHg o menos)
- pulso rápido y débil, piel húmeda y fría, agitación.

Diagnóstico Diferencial

En América se debe hacer para: Leptospirosis, malaria, hepatitis infecciosa, Fiebre Amarilla, meningococcemia, Rubeola ,Influenza y Sarampión (PAHO. Guidelines for Prevention and Control, 1994; Dietz et al., 1990).

DENGUE - Ficha de envío de la muestra para investigación de caso

DATOS PERSONALES

Apellido __________________________ Nombres __________________________________

Dirección: calle y Nº___________________________________________________________

Ciudad_______________________________ Provincia_______________________________

T.E.________________________ Dirección laboral__________________________________

Sexo _____________ Edad_____________ Fecha Nac ______________________________

Médico_______________________________ Hospital _______________________________

DATOS CLINICOS

Fecha de comienzo de los síntomas _____________________________

Fecha de toma de la muestra __________________________________

Fecha suero primera muestra __________________________________

Fecha suero segunda muestra _________________________________

otra muestra (especificar) _____________________________________

_____ _____ _______

Prueba del torniquete POSITIVA______NEGATIVA______NO HECHO______

Embarazo? SI______ Mes de embarazo________

DATOS EPIDEMIOLOGICOS

 1- Ha tenido Dengue anteriormente? (fiebre, dolor de cuerpo, rash) SI_____ NO____ NO SABE_____

2- Cuando? Mes_____ Año_____

3- Cuanto tiempo hace que vive en este lugar?

4- Ha viajado en los 10 días previos al comienzo de los síntomas?___

5- Donde viajó?______________________________

6-¿Está vacunado contra Fiebre Amarilla?

TOMA Y ENVIO DE MUESTRAS PARA DIAGNOSTICO DE DENGUE

- Extraer por lo menos 5 ml de sangre (en lo posible 10 ml). NO USAR ANTICOAGULANTE.
- Separar el suero.
- Transferir a un tubo estéril (preferentemente de plástico).
- Asegurar el cierre hermético.
- Rotular con tela adhesiva.
- Rótulo: Nombre y apellido, fecha de toma de la muestra, tipo de muestra (suero).
- Refrigerar de inmediato en heladera (4°C). NO CONGELAR.
- Enviar rápidamente al laboratorio en envase de telgopor con refrigerante.
- Acompañar la muestra con la ficha de envío de la muestra.

MUY IMPORTANTE: A partir de una muestra muy temprana (menor de 5 días desde el comienzo de los síntomas) se puede realizar el intento de aislamiento viral, por lo tanto el suero debe mantenerse a 4° C y enviarlo rápidamente al laboratorio. Si la muestra es a partir del 6° día y hasta 3 meses se puede hacer ELISA IgM. En caso que el resultado fuera positivo por esta técnica, se necesitan 2 muestras, aguda y convaleciente (de 10-20 días posteriores al inicio de los síntomas) para la confirmación diagnóstica.

Remitir a:

Dra. Gabriela Avilés
Instituto Nacional de Enfermedades Virales Humanas "Dr. Julio I. Maiztegui".
Monteagudo 2510
(2700) Pergamino.
TE: 0477-29712-29713-29714. FAX 0477-33045.

TOMA Y ENVIO DE MUESTRAS PARA DIAGNOSTICO DE ENCEFALITIS

- Extraer 5 ml de sangre (en lo posible 10 ml). NO USAR ANTICOAGULANTE.
- Separar el suero.
- En caso de disponer de líquido cefalorraquídeo enviar muestra junto con el
suero.
- Transferir a tubo estéril (preferentemente de plástico).
- Asegurar el cierre hermético.
- Rotular con tela adhesiva.
- Rótulo: Nombre y Apellido, fecha de toma de la muestra, tipo de muestra (suero o líquido cefalorraquídeo).
- Refrigerar de inmediato en heladera (4ºC). NO CONGELAR.
- Enviar rápidamente al laboratorio en envase de telgopor con refrigerante.
- Acompañar la muestra con la ficha de envío de la muestra.

IMPORTANTE: obtener una muestra de suero en período agudo y otra en la convalecencia (15-20 días posteriores al inicio de los síntomas) para la confirmación diagnóstica. Si el paciente fallece enviar biopsia de cerebro en hielo seco y/o suero de la sangre de los grandes vasos a 4ºC.

Remitir a :
Dra. Gabriela Avilés
Instituto Nacional de Enfermedades Virales Humanas
"Dr. Julio I. Maiztegui"
Monteagudo 2510 (2700)
Pergamino
TE 0477-29712/29713/29714 FAX 0477-33045.

- Avisar los envíos indicando medio o empresa de transporte.

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FICHA CLINICO EPIDEMIOLOGICA PARA ENCEFALITIS HUMANAS

Datos Personales: 

Apellido: .........................................................................................................................

Nombres: .......................................................................................................................

Domicilio : Calle ..................................................................................... Nº: .................. Piso:........... Do: ...........

Ciudad : .............................................................. Provincia:............................................

TE: ................................... Dirección laboral: ..................................................................

Sexo: ................................. Edad: ................................. Fecha Nacimiento: ....................

Médico.............................................................................................................................

Hospital: ..........................................................................................................................

Dirección: .......................................................................................................................

Datos Clínicos:

Fecha de comienzo de síntomas: ........................................

Fecha 1º suero: ...................................................................

Fecha 2º suero: ...................................................................

Fecha de LCR: ....................................................................

Otra muestra: ...................................................................... Fecha:.........................................

 Síntomas y Signos: ..............................................................................................................

............................................................................................................................................

Laboratorio: .........................................................................................................................

.............................................................................................................................................

Datos del LCR: .......................................................................................................................

.............................................................................................................................................

Evolución: ............................................................................................................................

............................................................................................................................................

Secuelas: ..........................................................................................................................

...........................................................................................................................................

Datos epidemiológicos:

 Si vive en el campo, Km. de distancia a la localidad más cercana:...................................

Lugares que visitó 10 días antes de enfermar: ..............................................................

..................................................................................................................................

Familiares o amigos que enfermaron recientemente: .....................................................

...................................................................................................................................

Donde ?: ...........................................................................................................................

Conoce sobre caballos con locura reciente: .................... Donde?:........................................

..........................................................................................................................................

Ocupación habitual:..........................................................................................................

Ocupaciones no habituales los 10 días antes:........................................................................

Notó que lo picaran mosquitos desde 10 días atrás?................................................................

Dentro o fuera de la casa: ......................................................................................................

Firma del médico: .........................................................................

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